Szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, inaktywowana, sorbowana. W jakim wieku przeprowadza się rutynowe szczepienie?

Skoncentrowana szczepionka z saponinami GOA Już w pojedynczej dawce 1 ml zapewniał niemal 100% ochronę zwierząt gospodarskich podczas eksperymentalnego zakażenia ogólnie przyjętą metodą. Wyrażona odporność występuje w dniach 10-14 i osiąga maksymalnie 3-4 tygodnie po szczepieniu. Odporność u dorosłych zwierząt utrzymuje się 6-12 miesięcy. Szczepienie przypominające znacząco wzmacnia układ odpornościowy. Z szerokim szczepienie zapobiegawcze Bydło jest zwykle szczepione raz w roku, świnie - dwa razy. VNA pojawiają się w surowicy krwi pod koniec pierwszego tygodnia, osiągają maksymalne miano po 3-5 tygodniach, następnie ich stężenie stopniowo maleje. VNA pojawia się szybciej i osiąga szczyt po podaniu szczepionek sorbowanych, natomiast po zastosowaniu szczepionek emulgowanych miano przeciwciał jest wyższe i utrzymują się one dłużej. Odporność siarowa jest dobrze wyrażona, przeciwciała u cieląt utrzymują się przez 5 miesięcy, chociaż ochrona bierna trwa do 3 miesięcy.

Odporność matczyna może tłumić ten efekt szczepienia dlatego u młodych zwierząt szczepienie cieląt wraz z systematycznym szczepieniem krów rozpoczyna się w wieku 3-4 miesięcy. Istnieją jednak dowody na to, że cielęta reagują na szczepienie jeden miesiąc albo wcześniej.

Występowanie i przebieg pryszczycy w niekorzystnej strefie są w dużej mierze zdeterminowane odpornością grupową. Jeśli poziom odporności w populacji gatunków zwierząt naturalnie podatnych przekroczy 75%, choroba zostanie opanowana, chociaż skuteczne są takie środki, jak kontrola importu zwierząt gospodarskich, kwarantanna i lokalny ubój zwierząt gospodarskich w miejscu dotkniętym chorobą.

Inaktywowane szczepionki mogą być jedno- lub wielowartościowe, to znaczy zawierać antygeny jednego lub większej liczby typów, podtypów i wariantów wirusa. Podczas produkcji szczepionki wieloważne należy określić stosunek ilościowy antygenów wirusowych, biorąc pod uwagę ich immunogenność.

Jednoczesne szczepienie dużych bydło przeciwko pryszczycy i zaraza okazała się możliwa. W przypadku jednoczesnego podania podskórnie w okolicę szyi inaktywowanej szczepionki wieloważnej GOA przeciwko pryszczycy i żywej szczepionki przeciwko dżumie różne strony, wówczas powstaje taka sama odporność, jak w przypadku oddzielnego szczepienia przeciwko każdej chorobie. Badania i rozwój w tej dziedzinie specyficzna profilaktyka pryszczyca osiągnęła wysoki poziom.

Dezaktywowany szczepionki na pryszczycę i usta są lekami wysoce skutecznymi, a technologia ich wytwarzania opiera się na jak najbardziej współczesne osiągnięcia nauki biologiczne. Sukces i produkcja inaktywowanych szczepionek przeciw pryszczycy może posłużyć jako prototypowe rozwiązania w badaniach i rozwoju inaktywowanych szczepionek przeciwko innym chorobom ludzi i zwierząt.

Nie jest jasne, czy nowoczesne inaktywowane szczepionki chronić zwierzęta przed utajoną infekcją w regionach endemicznych pryszczycy. Jeśli nie, jakie powinny być, aby osiągnąć ten cel?

Duże zainteresowanie dostarczają informacji, że u zaszczepionych świń po doświadczalnym zakażeniu pod nieobecność objawy kliniczne choroba, w której wykryto wirusa wysokie stężenie w ustach przez kilka tygodni. Jej obecność w Jama ustna zależy bezpośrednio od poziomu odporności. O wszczepieniu wirusa do organizmu zaszczepionych zwierząt potwierdzono także gwałtownym wzrostem miana VNA. Bardzo interesujące naukowo i praktycznie jest ustalenie, gdzie wirus namnaża się u takich zwierząt.

Żywe szczepionki przeciwko pryszczycy nie opracowany. Liczne próby w tym obszarze zakończyły się niepowodzeniem pozytywne rezultaty. Szczepy atenuowane z reguły okazywały się albo słabo immunogenne, albo odwracalne. Pod tym względem wirus pryszczycy różnił się znacząco od wirusa polio, którego atenuowane szczepy są z powodzeniem stosowane w doustnej immunizacji ludzi. Przyczyna tych różnic jest nieznana. Możliwe, że ma to podłoże w różnej patogenezie tych chorób. Poliomyelitis, podobnie jak wiele chorób wirusowych, ma złożoną patogenezę. Ich patogeny charakteryzują się pierwotnym miejscem replikacji, po którym następuje penetracja do jednego lub większej liczby narządów docelowych. W przypadku wirusa polio głównym miejscem rozmnażania jest jelito, miejscem wtórnym jest ośrodek centralny system nerwowy. Wydaje się, że takie wirusy są stosunkowo łatwo osłabiane przez selektywne zmiany tropizmu dla drugorzędowych narządów docelowych. Natomiast wirus pryszczycy, podobnie jak czynniki wywołujące szereg innych miejscowych infekcji, praktycznie nie mają wtórnego narządu docelowego. Uzyskanie atenuowanych szczepów immunogennych przeciwko takim chorobom prawdopodobnie wymaga innego podejścia i jest trudniejszym zadaniem.

Rinowirus koń 1 jest pod wieloma względami bliższy aftowirusom niż innym pikornawirusom. Niektóre szczepy tego wirusa mogą powodować wiremię choroba ogólnoustrojowa konie z zespół oddechowy. Wirus może być wydalany z kałem. Nie opracowano specjalnych środków zapobiegawczych.

Ostry choroba zakaźna może powodować straty nie tylko w dużych gospodarstwach, ale także w małych gospodarstwach. Dlatego ważne jest, aby w porę rozpoznać ich objawy i natychmiast rozpocząć leczenie, zwłaszcza że wiele z nich jest niebezpiecznych dla człowieka.

W ta recenzja Przyjrzyjmy się, czym jest pryszczyca, jakie jest jej niebezpieczeństwo i jak sobie z nią radzić.

Etiologia choroby

Czynnikiem sprawczym tej choroby jest jeden z najmniejszych wirusów - Dermaphilus, zawierający RNA. Pomimo mały rozmiar, ma wysoką zjadliwość (zdolność do zakażania).

Dermatotropizm jest wyraźnie wyrażony - najczęściej choroba zaczyna się od zakażenia obszarów skóry lub uszkodzonych błon śluzowych. Rozprzestrzenia się poprzez surową żywność, mięso i wydaliny.

Oprócz spożywania mleka lub niegotowanego mięsa jako pożywienia jest to również niebezpieczne dla ludzi. ścieżka kontaktu infekcja – lekarze weterynarii wiedzą, że dotykając zakażonego miejsca istnieje ryzyko „złapania” takiej choroby. Dotyczy to również cząstek śluzu. Na szczęście człowiek nie jest szczególnie podatny na jego działanie, czego nie można powiedzieć o zwierzętach (zwłaszcza parzystokopytnych).

Trudność polega na tym, że wirus dobrze znosi suszenie i zamrażanie oraz doskonale utrwala się w produktach uzyskanych od chorych zwierząt. Tak więc na wełnie może trwać 25–27 dni, a na mleku w temperaturze +4 °C - od 10 do 12 dni. Jeśli takie obciążenie dostanie się na ubrania, okres ten będzie jeszcze dłuższy - do 3,5 miesiąca.
Wirus pryszczycy umiera dość szybko (4–5 minut) po ugotowaniu; promienie słoneczne. W walce z nią pomagają także roztwory zasadowe i formalinowe.

W sumie istnieje 8 szczepów tego wirusa. W naszych warunkach głównymi są typy A i O; inne patogeny pojawiają się rzadko.

Czy wiedziałeś? Najnowsze na ten moment w Wielkiej Brytanii odnotowano poważną epidemię. W 2001 roku odnotowano około tysiąca ognisk tej choroby- epizootię wywołał szczep O, który spowodował szkody dla gospodarki o wartości 20 miliardów dolarów.

Pierwsze objawy

Okres wylęgania infekcja wirusowa trwa zwykle 2–4 dni, ale często ulega przedłużeniu. Przykładowo u świń może trwać 7–8 dni, a u świń do 2–3 tygodni. W tym okresie widoczne powody Nie ma powodów do niepokoju, choć choroba szybko postępuje.

Znaki ostrzegawcze to:

• ogólne osłabienie zwierzęcia i utrata apetytu;
• krótkotrwały wzrost temperatury;
• długotrwała biegunka;
• zwierzęta zaczynają upadać na przednie kończyny i wiotczeć (jest to typowe, jeśli bydło atakuje pryszczyca);
• letarg dziąseł;

• zwiększone wydzielanie śliny;
• w niektórych przypadkach zwierzę nie jest w stanie otworzyć pyska.

To jest najbardziej typowe przejawy choroby. Jeśli znajdziesz je u swoich zwierząt, natychmiast skontaktuj się z weterynarzem i rozpocznij leczenie.

Przebieg choroby

Choroba występuje w ostra forma. U zwierząt dorosłych przyjmuje ona zazwyczaj postać łagodną, ​​natomiast niezwykle rzadko spotyka się postać złośliwą (tzw. o przebiegu nietypowym).
U różnych zwierząt efekt infekcji następuje z uwzględnieniem cech gatunku i rasy.

Zacznijmy . Po upływie okresu ukrytego (1-3 dni, ale czasami od 7 do 20 dni) zwierzę całkowicie odmawia jedzenia, puls przyspiesza, a przeżuwanie ustaje. W 2-3 dniu fazy aktywnej pojawiają się afty (wysypkowe pęcherze) wewnątrz warg, na błonie śluzowej policzków, języka i brzegów szczęki.

W ciężkich przypadkach takie formacje są widoczne na wymieniu i między kopytami. Rzadko zdarza się uszkodzenie wszystkich kończyn, częściej jest to kulawizna na jednej parze nóg.

Ważny! Po usunięciu chorego zwierzęcia z lokalu sprzęt i sam budynek należy potraktować roztworem dezynfekującym- 1% chloraminy jest dość mocny.

Po 12–24 godzinach od pojawienia się afty pękają, tworząc erozję. Jednocześnie temperatura wraca do normy, chociaż ślinienie pozostaje obfite, a w kącikach ust widoczna jest piana. „Wrzody” goją się w ciągu tygodnia, ale w przypadku powikłań proces ten może zająć 13–20 dni.
Na kończynach widać te same afty i obrzęki. Pękają również i goją się w ciągu 4–8 dni. Jeśli zmiana jest duża, istnieje ryzyko choroby ropne a nawet odwarstwienie rogówki.

Afty krowy mleczne kanały sutków ulegają zapaleniu, dotknięte ćwiartki działają z upośledzeniem. Przejawia się to zmianą składu mleka: staje się ono śluzowate i gorzkie. Jeśli kanał sutka jest zablokowany przez strupy, zaczyna się. Jednocześnie wydajność spada do 60–75%, a jej przywrócenie zajmuje miesiące.

Szczególnie niebezpieczna dla cieląt jest choroba taka jak pryszczyca. Nie cierpią na afty, ale chorobie towarzyszą poważne zakłócenia przewód żołądkowy. Jeśli pomoc się spóźni, może rozpocząć się śmierć.

Wirus „czysty” przestaje działać po 7–10 dniach. W przypadku powikłań choroba trwa znacznie dłużej, nawet do miesiąca. Są to głównie problemy związane z liniami żołądkowymi i laktalnymi.
Z nietypowa forma jeszcze trudniejsze: zwierzę, dochodząc do siebie, nagle „poddaje się”, nie chce jeść, zostaje sparaliżowane tylne kończyny. Taka różnica może wystąpić 6–10 dni po wystąpieniu choroby. Uderza to w serce, a śmiertelność sięgająca 20–40% w takich przypadkach wiąże się z jego zatrzymaniem.

Czy wiedziałeś? Pryszczyca od dawna stanowi problem dla hodowców bydła: pierwszy opis kliniczny zwierząt przedstawił lekarz D. Fracastro już w 1546 roku. Podobny obraz ludzi opisali znacznie później Niemcy Frosch i Leffler, którzy w 1897 roku udowodnili wirusowy charakter choroby.

Epidemia pryszczycy jest jeszcze poważniejsza, nie oszczędzając młodych zwierząt. Po 1–2 dniach inkubacji pojawia się gorączka i zmniejsza się apetyt. Dotknięte są kończyny, świnie często kuleją (ich kopyta mogą nawet spaść). Afty są widoczne na gruczołach sutkowych, plamkach, rzadko obserwuje się je w jamie ustnej. Ciężkiemu przebiegowi choroby towarzyszy krwawa biegunka i śluz, krwotoki w nerkach i płucach.

Dorośli chorują przez długi czas: od tygodnia do 20–25 dni. W przypadku prosiąt pryszczyca jest całkowicie śmiertelna (śmiertelność wynosi co najmniej 60%), pierwsze dwa dni aktywności wirusa są uważane za najbardziej niebezpieczne.
Z kozami jest trochę łatwiej. Po 2–7 dniach okresu utajonego apetyt znika, zwierzę gorączkuje i zaczyna utykać. Jednocześnie trudno mu otworzyć usta i słychać zgrzytanie zębów.

Na kopytach pojawiają się afty, żuchwa, wargi i wymiona.

Wypływa z nich lepka ciecz. Kozy są bardziej odporne na pryszczycę, a powikłania występują rzadko.

Pełny powrót do zdrowia następuje w ciągu dwóch tygodni.

Po 2–3 dniach okresu utajonego owce wiotczą, czasami przestają przeżuwać pokarm i mało się ruszają. Temperatura może osiągnąć 41–41,5 ° C.

W ich przypadku afty są małe, szybko pękają i wcześnie się goją. Dotknięty obszar jest taki sam: szczeliny i korona kopyt, dziąsła, język i wargi, Górna szczęka do zębów.

Owce wracają do zdrowia po 10–12 dniach. Jagnięta często umierają z powodu powikłań takich jak posocznica (uszkodzenie tkanek i układu krążenia).

Ważny! Przed posiłkami pacjentom podaje się 0,1 g znieczulenia, które lekko wygładza dyskomfort które pojawiają się podczas jedzenia.

Jest jednak jedno zastrzeżenie: w dużych stadach wirus działa powoli i słabo, więc jego działanie nie jest widoczne. Ten powolny postęp jest bardzo niebezpieczny i może trwać 3-4 miesiące lub do czasu, aż stanie się ostry.

Leczenie chorych zwierząt

Ze względu na różnorodność objawów wirusa przemysł nie produkuje uniwersalnych (z wyjątkiem immunolaktonu, a nawet wtedy nie zawsze jest to odpowiednie). Dlatego leczenie sprowadza się do eliminacji objawów.

Chore zwierzę jest natychmiast izolowane, dodaje się czystą ściółkę i picie dużej ilości płynów- wystarczy i czysta woda. Jednocześnie powietrze w pomieszczeniu powinno być świeże, a nie stęchłe. Zwierzęta mają zapewniony spokój, starają się ich nie ruszać, jeśli nie jest to absolutnie konieczne (to dodatkowo obciąża słabe ciało zwłaszcza na sercu).

Pokarm jest lekkostrawny: latem jest to trawa, zimą daje miękkie siano lub wysokiej jakości kiszonkę.

Jeżeli pryszczyca u zwierząt występuje w zwykłej postaci, środki lecznicze sprowadza się do następujących działań:

• Jama ustna jest płukana słabe rozwiązania nadmanganian potasu (0,1%) lub furatsilina (0,5%). Odpowiedni jest również kwas octowy w stężeniu 2%.
• W przypadku ciężkich uszkodzeń błony śluzowej jamy ustnej stosuje się maści na bazie miedzi, znieczulenia lub nowokainy. Przyda się również olej rybny.

Czy wiedziałeś? Szczepienia w obecnej formie- w dużej mierze dzięki Louisowi Pasteurowi. Jego dziedzictwo i ciężka praca robią wrażenie: wyprodukował leki przeciwko Syberii w 1881 r., a cztery lata później był w stanie „neutralizować” wściekliznę za pomocą szczepionki.

• Kończyny są czyszczone codziennie. Kopyta i korony są traktowane kompozycją smoły i olej rybny w równych proporcjach. Aby utrwalić wynik, zwierzę przepuszcza się przez trociny nasączone smołą. W dużych gospodarstwach w tym samym celu stosuje się kąpiele formaldehydowe (roztwór 5%).

Na ciężkie formy choroby wykonują następujące manipulacje:

• Silnie dotknięte obszary kończyn smaruje się jodem. Po oczyszczeniu kopyta usuń martwą tkankę i przyżegaj ranę proszkiem (po ½ nadmanganianu i streptocydu), po czym nakłada się bandaż.
• Afty na wymieniu leczy się maścią nowokainowo-trypoflawinową na bazie wazeliny. Jest z nim również mieszany (15% objętości). Pomaga również maść Syntomycyna.
• Jeśli powikłanie objawia się sepsą, dożylnie podaje się słaby 0,5% roztwór nowokainy. Stosować 0,5 ml mieszanki na 1 kg masy ciała.
• Używają również zacieru z mąki, który codziennie wlewa się przez sondę, 15–20 litrów.
• Aby wzmocnić mięsień sercowy, przygotowuje się mieszaninę: 6 g bromku potasu, 10 ml nalewki waleriany i 15 ml konwalii dodaje się do 400 ml wody destylowanej. Jest to dawka jednorazowa.

Zapobieganie

Choroba pryszczycy, jak każda inna Choroba wirusowa, łatwiej jest zapobiegać niż leczyć.

Główne miejsce zajmują szczepienia. Najczęściej kompozycję saponin podaje się w ilości 1 ml. Zaczyna działać po 10–14 dniach, osiągając szczyt ochronny maksymalnie po miesiącu.

Odporność utrzymuje się od 6 miesięcy do roku. Bydło jest szczepione ponownie raz w roku, natomiast świnie muszą otrzymać dwa szczepienia rocznie.

Pod uwagę brany jest także wiek: np. u cieląt odporność „matczyna” jest bardzo silna i przez pierwsze 3 tygodnie może zakłócić działanie szczepionki. U kóz i jagniąt jest znacznie słabszy, a prosięta są praktycznie bez ochrony.

Odpoczynek środki zapobiegawcze są w dużej mierze tradycyjne:

• regularne sprzątanie lokalu wraz ze zmianą pościeli;
• umieszczanie zwierząt gospodarskich zgodnie ze standardami (bez stłoczenia);
• okresowe badanie zwierzęcia, Specjalna uwaga zwracaj uwagę na jamę ustną, stan skóry, sierści i płytek kopytowych;
• stosowanie wysokiej jakości paszy, wody i dodatków;
• ograniczanie kontaktu ze zwierzętami już zakażonymi (np. nie wyprowadzanie ich na to samo pastwisko).

Nie możesz tego leczyć samodzielnie - to kwestia lekarza weterynarii. Jeśli jego wysiłki nie wystarczyły i infekcja się rozprzestrzeniła, do akcji wkraczają władze sanitarno-epidemiologiczne. Decydują się na wprowadzenie kwarantanny lub uboju.

Czy pryszczyca jest niebezpieczna dla człowieka?

Jak pamiętamy, wirus taki niechętnie przenosi się na ludzi, choć nie należy bagatelizować jego zagrożenia.
Do grupy ryzyka zaliczają się osoby pracujące bezpośrednio ze zwierzętami: lekarze weterynarii, dojarki, pasterze, pracownicy rzeźni i zakładów mięsnych. Ale nawet w gospodarstwie można się zarazić poprzez kontakt lub spożycie mięsa i mleka od chorego „bydła”.

Wynalazek dotyczy dziedziny wirusologii i biotechnologii weterynaryjnej i dotyczy szczepionki przeciwko pryszczycy typu A. Szczepionka zawiera niezjadliwy i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu wirusa z rodziny Aphtae epizooticae. Picornaviridae, rodzaj Aphtovirus, serotyp A, zdeponowany w zbiorach Federalnej Instytucji Państwowej „VGNKI” pod adresem numer rejestracyjny nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEPA nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP, otrzymywany w ciągłej hodowli komórkowej VNK-21, będący zawiesiną zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy, adiuwanty wodorotlenek glinu z saponiną i podłożem pomocniczym w skutecznych proporcjach. Szczepionka jest wysoce immunogenna i może zapewnić skuteczna ochrona od czynnika sprawczego pryszczycy krążącej w krajach Zakaukazia, Azja centralna, Środkowy i Daleki Wschód. 11 pensja akta, 14 tablic, 1 il., 4 pr.

Rysunki do patentu RF 2526570

Wynalazek dotyczy dziedziny wirusologii i biotechnologii weterynaryjnej i może być stosowany w opracowywaniu i produkcji inaktywowanej, sorbowanej szczepionki przeciwko pryszczycy typu A.

Pryszczyca jest chorobą zakaźną o ostrym przebiegu Choroba wirusowa zwierzęta parzystokopytne. Charakteryzuje się tendencją do szerokiego rozprzestrzeniania się i przebiegiem epizootycznym. Chorobie towarzyszy duże straty mleko, mięso i inne produkty pochodzenia zwierzęcego, komplikuje transakcje handlowe i działalność gospodarcza. Aby zapewnić trwały dobrobyt kraju w zakresie pryszczycy w Federacja Rosyjska Wdrażany jest system działań, którego priorytetem jest zapobieganie przedostawaniu się wirusa pryszczycy na terytorium, a na obszarach wysokiego ryzyka – profilaktyka szczepionkowa. Obecnie w Federacji Rosyjskiej i krajach WNP do uodporniania bydła dużego i małego przeciwko pryszczycy stosuje się z reguły inaktywowane szczepionki sorbowane, a do uodparniania świń stosuje się inaktywowane szczepionki emulsyjne.

Technologia wytwarzania szczepionki przeciwko pryszczycy z inaktywowanego wirusa rozpoczyna się od selekcji szczepów produkcyjnych w oparciu o analizę epidemiologiczną dynamiki pryszczycy w kraju i krajach sąsiadujących. Tworząc leki do specyficznej profilaktyki, wykorzystuje się odpowiednie typy wirusa pryszczycy i selekcjonuje się szczepy o szerokim spektrum antygenowym w ramach typu o wyraźnej immunogenności krzyżowej. Odcedź z szeroki zasięg immunogenność i spełnienie wymagań regionu wybiera się poprzez badanie jej w reakcji ochrony krzyżowej lub częściej w reakcji neutralizacji krzyżowej. Z reguły jako szczep produkcyjny wykorzystuje się populację wirusa, co w połączeniu z systemem i warunkami hodowli przemysłowej zapewnia gwarantowaną i wysoką akumulację składników 146S i 75S wirusa oraz produkcję immunogennej szczepionki.

Ponadto szczep produkcyjny jest wymagany do zapewnienia stabilności wirusa podczas oczyszczania ze składników tkankowych i zatężania, a także zachowania wirusa podczas inaktywacji i długotrwałego przechowywania.

Czynnik sprawczy pryszczycy charakteryzuje się znaczną zmiennością antygenową szczepów w obrębie tego samego serotypu, która jest wykrywana w różnych okresach czasu i na różnych terytoriach i zależy od składu gatunkowego podatnej populacji, jej stanu odporności i wielu innych różne czynniki. Zmienność antygenowa wirusa pryszczycy spowodowana jest podstawieniami aminokwasów we fragmentach polipeptydowych (epitopach antygenowych) eksponowanych na powierzchni białek kapsydu. Zmiany w widmie antygenowym, odpowiadające aktualizacji struktury nowego szczepu terenowego, mogą wahać się od niewielkich, wykrywanych przez przeciwciała monoklonalne, do znaczących, rejestrowanych przy użyciu tradycyjnych immunoglobulin poliklonalnych. Znaczące zmiany w charakterystyce antygenowej naturalnego szczepu wysokie prawdopodobieństwo powodują osłabienie odporności swoistej wywołane przez antygen niehomologiczny. Powodują także trudności w diagnostyce specyficznej dla szczepu.

W związku z tym istnieje potrzeba stworzenia nowych narzędzi diagnostycznych i swoistej immunoprofilaktyki.

Znane są szczepy wirusa pryszczycy typu A, które były wykorzystywane jako szczepy produkcyjne w ZSRR i Federacji Rosyjskiej przez ostatnie 50 lat.

Należą do nich następujące szczepy: A 7 nr 103, wyizolowany w 1962 r. w rejonie Kujbyszewa; A 7 nr 2, przydzielony w 1965 r. w Tadżyckiej SRR; A nr 717/73, przydzielony w 1973 r. na terytorium Stawropola.

Szczepy te posłużyły do ​​uzyskania szczepionek diagnostycznych i przeciw pryszczycy stosowanych w różnych regionach kraju.

Jednakże po wyeliminowaniu pryszczycy wywołanej przez antygenowo podobne szczepy wirusów zaprzestano ich stosowania i obecnie utrzymywane są jedynie w kolekcji szczepów mikroorganizmów Federalnej Państwowej Instytucji Budżetowej „ARRIAH”.

Znana jest inaktywowana, sorbowana szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, zawierająca substancję czynną w postaci niezjadliwego i oczyszczonego materiału antygenowego ze szczepu A 22 nr 550, homologicznego z czynnikiem wywołującym zakażenie, uzyskanego w wrażliwej układ biologiczny oraz ukierunkowane dodatki w postaci adiuwanta i podłoża wspomagającego w efektywnym stosunku.

Szczep A 22 nr 550 wirusa pryszczycy został wyizolowany w 1964 roku w Azerbejdżanie i jest stosowany w Federacji Rosyjskiej jako szczep produkcyjny do produkcji specyficznych środków zapobiegawczych i diagnostycznych stosowanych w całej Rosji i na obszarze poradzieckim Państwa.

Znana jest inaktywowana, sorbowana szczepionka ze szczepu A (Georgia) 1999/nr 1721 wirusa pryszczycy Aphtae epizooticae typu A, wyizolowanego w 1999 roku w Republice Gruzji.

Znana jest inaktywowana, sorbowana szczepionka ze szczepu nr 1707 „Armenia-98” wirusa pryszczycy Aphtae epizooticae typu A.

Szczepionka przeciwko wirusowi pryszczycy typu A ze szczepu produkcyjnego A nr 1707 „Armenia-98”, stosowanego w otulinie Zakaukazia.

Wadą szczepionek wytwarzanych z tych szczepów jest brak działania antygenowego i immunogennego wobec epizootycznych izolatów wirusa pryszczycy typu A krążącego obecnie w krajach Zakaukazia, Azji Środkowej i Bliskiego Wschodu (Turcja, Iran itp.). ) ze względu na istniejące znaczące różnice antygenowe.

Najbliższa proponowanemu wynalazkowi pod względem ogółu istotnych cech jest inaktywowana sorbowana szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, zawierająca substancję czynną w postaci niezjadliwego i oczyszczonego materiału antygenowego ze szczepu A (Georgia) 1999/ nr 1721, otrzymywany w wrażliwym układzie biologicznym, oraz ukierunkowane dodatki w postaci adiuwantów GOA z saponiną i podłożem pomocniczym w proporcji mcg:

Szczep A (Gruzja) 1999/nr 1721-DEP został wyizolowany w 1999 roku w Republice Gruzji i jest stosowany w Federacji Rosyjskiej jako szczep produkcyjny do produkcji specyficznych środków zapobiegawczych i diagnostycznych stosowanych w całej Rosji i krajach WNP.

Jako czuły układ biologiczny stosuje się hodowlę zawiesinową komórek BHK-21, a jako podłoże pomocnicze stosuje się roztwór Earle’a bez surowicy z dodatkiem FGMS, GBX i antybiotyków o pH 7,4–7,6.

Do oczyszczenia zawiesiny zawierającej wirusa z zanieczyszczeń stosuje się poliheksametylenoguanidynę (PHMG), a do inaktywacji wirusa aminoetylenoiminę (AEEI). Aby zneutralizować AEEI, do zawiesiny dodaje się tiosiarczan sodu.

Niewirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A (Georgia) 1999/nr 1721 jest zawiesiną głównie immunogennych składników 146S i 75S wirusa pryszczycy. Jako adiuwanty stosuje się GOA z saponiną.

Główną wadą znanych szczepionek, w tym szczepionki prototypowej, są różnice antygenowe w stosunku do izolatów wirusa pryszczycy typu A izolowanych w różnych odstępach czasowych, a szczepionki przygotowane na ich bazie zapewniają skuteczną ochronę zwierząt jedynie przed zakażeniem wirusem pryszczycy typu A. wirus homologiczny.

W 2003 roku w Iranie wyizolowano nowy izolat wirusa pryszczycy typu A, istotnie różniący się od wcześniej badanych szczepów tego typu. W latach 2005-2006. otrzymano pryszczycę typu A szerokie zastosowanie w krajach Azji Zachodniej – Iran, Turcja, Arabia Saudyjska i Pakistanie. W lutym 2006 r. pryszczyca typu A linii Iran/05 przedostała się do Tracji, europejskiej części Turcji, która graniczy z Bułgarią i Grecją. Przeprowadzenie 100% szczepień wszystkich przeżuwaczy szczepem A 22 w Tracji w lutym-marcu 2006 roku zapobiegło rozprzestrzenieniu się pryszczycy na sąsiednie Grecję i Bułgarię, jednak po 3-4 miesiącach pojawiły się nowe przypadki tej choroby.

W związku z tym istniała potrzeba uzyskania nowa szczepionka przeciwko wirusowi pryszczycy serotyp A ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 w celu zapewnienia bezpieczeństwa terytorium Rosji i krajów sąsiadujących z tym patogenem.

Zadaniem stworzenia niniejszego wynalazku było opracowanie inaktywowanej, sorbowanej szczepionki przeciw pryszczycy, która zapewnia skuteczną ochronę podatnych zwierząt przed wirusem epizootycznej pryszczycy typu A krążącym w krajach Zakaukazia, Azji Środkowej , Bliskiego i Dalekiego Wschodu.

Technicznym rezultatem zastosowania proponowanego wynalazku jest poszerzenie arsenału inaktywowanych sorbowanych szczepionek przeciwko pryszczycy typu A.

Powyższy wynik techniczny uzyskano poprzez stworzenie inaktywowanej, sorbowanej szczepionki przeciwko pryszczycy typu A, charakteryzującej się następującym zestawem cech.

Proponowana szczepionka zawiera 1 cm 3 leku: substancję czynną w postaci awirulentnego i oczyszczonego materiału antygenowego ze szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP, otrzymywanego najlepiej w hodowli zawiesinowej komórek BNK-21 w ilości co najmniej 3,0 µg oraz ukierunkowane dodatki: GOA korzystnie w ilości 11000,0 15000,0 µg, saponina korzystnie w ilości 500,0 ÷ 1500,0 µg oraz pożywka konserwacyjna w ilości do 1000000,0 µg.

Oryginalny wirus do uzyskania szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP został wyizolowany w 2007 roku w Republice Kirgistanu. Szczep uzyskano poprzez wielokrotne kolejne pasaże na wrażliwych hetero- i homologicznych hodowlach komórkowych. Szczep jest przystosowany do komórek pierwotnie trypsynizowanych nerka wieprzowa oraz ciągłe hodowle komórkowe BNK-21, IBRS-2 i PSGK-30.

Do produkcji szczepionki najlepiej stosować hodowlę zawiesinową komórek BHK-21 jako czuły układ biologiczny, a jako podłoże pomocnicze stosuje się roztwór Earle'a bez surowicy z dodatkiem FGMS, GBX i antybiotyków o pH 7,4-7,8.

Do inaktywacji wirusa stosuje się AEEI, który dodaje się do zawiesiny zawierającej wirusa w stężeniu 0,025 0,05%. Po zakończeniu inaktywacji AEEI neutralizuje się przez dodanie do zawiesiny tiosiarczanu sodu.

Powstały antygen oczyszcza się z zanieczyszczeń balastowych za pomocą PHMG, który dodaje się do zawiesiny w stężeniu 0,005 0,007%.

Niewirulentny i oczyszczony materiał antygenowy szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP jest zawiesiną zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy.

Ilościową i jakościową zawartość surowców wirusowych określa się metodą turbidymetryczną.

Do przygotowania szczepionki wykorzystuje się materiał wirusowy zawierający co najmniej 0,5 µg immunogennych składników 146S i 75S wirusa pryszczycy na 1 cm3.

Wymagane stężenie składników immunogennych 146S i 75S wirusa pryszczycy w proponowanej szczepionce, wynoszące co najmniej 3 µg na 1 cm 3 gotowego produktu, uzyskuje się poprzez dodanie wyliczonej ilości adiuwanta-sorbentu GOA do awirulentnego i oczyszczonego materiału antygenowego. Optymalna zawartość GOA w 1 cm3 gotowego leku mieści się w zakresie od 11000,0 µg do 15000,0 µg.

Do powstałego koncentratu dodaje się dodatkowe 10%. roztwór wodny saponiny w ilości 1500,0 mcg na dawkę szczepionki. Przykładowo dla optymalnej dawki szczepionki wynoszącej 2 cm 3 stężenie końcowe wynosi 0,075%, co odpowiada 750,0 µg jej zawartości w 1 cm 3 gotowego preparatu.

Powstała szczepionka ma postać cieczy jasnożółty kolor z luźnym osadem sorbentu, który podczas przechowywania tworzy się na dnie butelki i łatwo rozpada się podczas wstrząśnięcia, tworząc jednorodną zawiesinę.

Proponowany wynalazek zawiera następujący zestaw istotnych cech zapewniających uzyskanie wyniku technicznego we wszystkich przypadkach, dla których żądana jest ochrona prawna.

2. Substancja czynna w postaci awirulentnego i oczyszczonego materiału antygenowego ze szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP w skutecznej ilości.

3. Ukierunkowane suplementy.

Cechy wynalazku charakteryzujące proponowaną szczepionkę i pokrywające się z cechami prototypu, w tym z koncepcją rodzajową odzwierciedlającą przeznaczenie, to:

1. Szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, inaktywowana, sorbowana.

2. Substancja czynna.

3. Ukierunkowane suplementy.

W porównaniu ze szczepionką prototypową, istotnym wyróżnikiem proponowanej szczepionki jest to, że m.in substancja aktywna zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A w skutecznej ilości.

Niniejszy wynalazek charakteryzuje się także innymi cechy charakterystyczne, wyrażający określone formy wykonania lub specjalne warunki jego użycie.

1. Niezjadliwy i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007, uzyskany we wrażliwym układzie biologicznym i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A.

2. Awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007, uzyskany najlepiej w ciągłej hodowli komórek pochodzenia zwierzęcego i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A .

3. Awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007, uzyskany najlepiej w ciągłej hodowli komórek BHK-21 i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A .

4. Awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP, uzyskany najlepiej w ciągłej hodowli komórek BHK-21 i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typ A w ilości co najmniej 3,0 mcg na 1 cm 3 gotowego leku.

5. Jako ukierunkowany dodatek szczepionka zawiera adiuwant, sorbent GOA.

6. GOA korzystnie występuje w ilości 11000,0 15000,0 mcg na 1 cm 3 gotowego preparatu.

7. Szczepionka zawiera adiuwant saponinę jako dodatek ukierunkowany.

8. Saponina korzystnie występuje w ilości 500,0 1500,0 mcg na 1 cm 3 gotowego preparatu.

9. Jako dodatek ukierunkowany, szczepionka zawiera podłoże pomocnicze.

10. Pożywka podtrzymująca w ilości do 1 000 000,0 mcg na 1 cm 3 gotowego leku.

11. Niezjadliwy i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007, uzyskany najlepiej w ciągłej hodowli komórkowej BHK-21 i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A, Proporcje GOA, saponiny i podłoża pomocniczego, mcg:

Proponowana szczepionka charakteryzuje się wysoką aktywnością immunogenną i zapewnia niezawodna ochrona przeciwko wirusowi pryszczycy serotyp A, krążącemu w krajach Zakaukazia, Azji Środkowej, Bliskiego i Dalekiego Wschodu.

Osiągnięcie wyniku technicznego zastosowania wynalazku osiągnięto poprzez fakt, że skład proponowanej szczepionki zawiera jako substancję czynną materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy serotyp A , która w postaci natywnej oraz po inaktywacji i zapewnieniu produkcji sorbowanej inaktywowanej szczepionki przeciwko pryszczycy wykazuje wysoką aktywność biologiczną, antygenową i immunogenną, co stwarza skuteczną ochronę podatnych zwierząt przed wirusem pryszczycy serotyp A, co powoduje ogniska choroby w ostatnie lata w krajach Zakaukazia, Azji Środkowej, Bliskiego i Dalekiego Wschodu.

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 jest nowy, wcześniej nieznany. Oryginalny wirus do uzyskania szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wyizolowano z próbek materiału aftowego od chorej jałówki, otrzymanych przez Federalną Instytucję Państwową „ARRIAH” w grudniu 2007 r. od Republiki Kirgistanu (badanie nr 2045 „Kirgistan /07"). Szczep produkcyjny A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A uzyskano w drodze kolejnych pasaży na wrażliwych hetero- i homologicznych hodowlach komórkowych.

Powstały szczep został zdeponowany 7 lipca 2009 roku w Ogólnorosyjskiej Państwowej Kolekcji Szczepów Mikroorganizmów Stosowanych w Medycynie Weterynaryjnej i Hodowli Zwierząt Federalnej Agencja rządowa„Ogólnorosyjski centrum stanowe jakość i standaryzacja leki dla zwierząt i pasz” (FGU „VGNKI”) pod numerem rejestracyjnym (link): szczep produkcyjny A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP wirusa pryszczycy typu A.

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007-DEP wirus pryszczycy typu A charakteryzuje się następujące znaki i właściwości.

Właściwości morfologiczne

Szczep A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP należy do rodziny Picornaviridae, rodzaju Aphtovirus, serotyp A i ma cechy morfologiczne, charakterystyczny dla czynnika wywołującego pryszczycę: kształt wirionu jest dwudziestościenny, wielkość 23-25 ​​​​nm. Wirion składa się z cząsteczki RNA zamkniętej w białkowej otoczce. Otoczka białkowa składa się z 32 kapsomerów ułożonych w symetrię sześcienną.

Właściwości antygenowe

Ze względu na swoje właściwości antygenowe szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy należy do serotypu A. Wirus jest stabilnie neutralizowany przez homologiczną surowicę odpornościową. Wirus nie wykazuje aktywności hemaglutynującej (aktywność HA). U odzyskanych zwierząt w surowicy krwi powstają przeciwciała, które wykrywa się w teście immunoenzymatycznym (ELISA) i reakcji mikroneutralizacji (RMN). Uodpornianie bydła szczepionką wykonaną z inaktywowanego wirusa powoduje powstawanie specyficznych przeciwciał wykrywanych w testach ELISA, RDP i RMN.

Z hiperimmunizacją świnki morskie stężony antygen z inaktywowanego wirusa pryszczycy typu A, szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 indukuje powstawanie przeciwciał swoistych i neutralizujących wirusa, wykrywanych w RSC w rozcieńczeniach 1:80 1:160 oraz w teście ELISA w rozcieńczeniach 1:10000 1:12000.

Badano pokrewieństwo antygenowe szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A ze szczepem produkcyjnym wirusa pryszczycy A 22 nr 550 oraz szczepami wyizolowanymi wcześniej na kontynencie azjatyckim w RSC, ELISA i RMN.

Wyniki badań w RSC przedstawiono w tabeli 1. Związek antygenowy (R) szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 z innymi wirusami pryszczycy serotypu A wyniósł 8% dla A/Iran/97 , 28% dla A 22/Irak 24/64, A/Iran/05 – 68%, A/Turcja/06 – 66%, A 22 nr 550 – 14%.

Wyniki badań w RMN przedstawiono w tabeli 2. Zgodność antygenowa (r 1) dotyczyła A/Iran/97 - 0,125, A 22 nr 550 - 0,17, A 22 /Irak 24/64 - 0,6, A/Turcja / 06 - 0,5. Przy wartości r 1 > 0,3 izolat terenowy i szczep produkcyjny są ze sobą ściśle powiązane, a szczepionka ze szczepu produkcyjnego będzie chroniła przed wirusem epizootycznym, przy wartości r 1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса .

Wyniki badań ELISA przedstawiono w tabeli 3. Zgodność antygenowa (r 1) dotyczyła A 22 nr 550 - 0,24, A 22 /Irak 24/64 - 0,24, A/Iran/97 - 0,19, A/ Turcja/06 - 0,5. Przy wartości r 1 równej 0,4 1,0 izolat terenowy i szczep produkcyjny są w ścisłym związku antygenowym; przy wartości r wynoszącej 0,2 0,39 izolat terenowy jest antygenowo spokrewniony ze szczepem produkcyjnym, szczepionkę ze szczepu produkcyjnego można zastosować w przypadku nie znalezienia więcej szczepu spokrewnionego oraz pod warunkiem, że zwierzęta zostały uodpornione więcej niż raz; przy wartości r 1<0,2 полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом .

Molekularne cechy genetyczne

Metodą sekwencjonowania nukleotydów określono pierwotną strukturę genu VP 1 wirusa pryszczycy typu A szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 i wydedukowano pierwotną strukturę białka VP 1 analiza sekwencji nukleotydów wykazała, że ​​szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A ma ścisłe pokrewieństwo filogenetyczne ze szczepami A/Iran/05 i A/Turkey/06 (procent różnic nukleotydowych 3,82 4,3 i 4,46÷5,57) i różni się istotnie od szczepu szczepionkowego A 22 nr 550. Ponadto różni się od szczepów tego typu wirusa wyizolowanych w 1998 roku w Armenii i Turcji oraz w Gruzji i Iranie w 1999 roku (patrz dendrogram). Stopień różnic nukleotydowych w sekwencji szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A ze szczepami wirusa pryszczycy typu serologicznego A wynosił: ze szczepem A 22 nr. 550 - 18,15%, ze szczepem A nr 1707 "Armenia-98" - 17, 68%, ze szczepem A/Turcja/98 - 17,2%, ze szczepem A (Georgia) 1999/nr 1721 - 18,79%, ze szczepem A/Iran/99 – 17,68%.

Zatem analiza filogenetyczna wykazała, że ​​szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A należy do nowej linii genetycznej wirusa pryszczycy typu serologicznego A.

Charakterystyka biotechnologiczna

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 rozmnaża się w jednowarstwowej hodowli komórek nerek świńskiej (SP), ciągłych hodowlach komórkowych PSGK-30, VNK-21 i IB-RS-2 i w ciągu 20-24 godzin od inkubacji wirusa wydajność w tych hodowlach komórkowych osiąga wartości od 6,33 do 8,25 lg TCD 50 -/cm 3 (Tabela 4). W przypadku masywnej infekcji (1 10 TCD/komórkę) powoduje CPD po 5 godzinach. Zachowuje oryginalne cechy po pasażowaniu w hodowlach komórkowych przez 10 pasaży (okres obserwacji).

Charakterystyka chemio- i genotaksonomia

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 Wirus pryszczycy typu A jest wirusem zawierającym RNA o masie cząsteczkowej 7 × 10 6 D.

Kwas nukleinowy jest reprezentowany przez jednołańcuchową cząsteczkę liniową o masie cząsteczkowej 2,8 × 10 6 D. Wirion ma otoczkę białkową składającą się z czterech głównych białek VP 1, VP 2, VP 3 i VP 4. Błona lipoproteinowa jest nieobecna.

Głównym białkiem antygenowym jest VP 1. Wirion zawiera około 31,5% RNA i 68,5% białka. Virion RNA jest zakaźny i bierze udział w tworzeniu białek prekursorowych w zakażonych komórkach. Prekursory z kolei są rozszczepiane, tworząc bardziej stabilne polipeptydy strukturalne i niestrukturalne wirusa. Spośród 8 niestrukturalnych polipeptydów, które gromadzą się w zakażonych komórkach, jeden (BP 56a) jest zależną od RNA polimerazą RNA zaangażowaną w replikację RNA nowych wirionów.

Właściwości fizyczne

Masa wirionu wynosi 8,4×10 -18 g. Współczynnik sedymentacji 146S w gradiencie sacharozy. Gęstość wyporu 1,45 g/cm3.

Odporność na czynniki zewnętrzne

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 jest odporny na eter, chloroform, freon, aceton i inne rozpuszczalniki organiczne i detergenty. Najbardziej stabilny przy pH 7,2 7,6. Zmiany pH, zarówno kwaśne, jak i zasadowe, prowadzą do inaktywacji wirusa.

Wrażliwy na formaldehyd, promieniowanie UV, promieniowanie, wysokie temperatury.

Dodatkowe cechy i właściwości

Działanie immunogenne - immunogenne jako część inaktywowanej szczepionki.

Reaktogenność - nie posiada właściwości reaktogennych.

Patogeniczność - chorobotwórcza dla zwierząt parzystokopytnych, nowonarodzonych myszy, świnek morskich.

Zjadliwość - zjadliwość dla naturalnie podatnych zwierząt podczas infekcji kontaktowych, aerozolowych i pozajelitowych.

Stabilność – zachowuje swoje pierwotne właściwości biologiczne podczas pasażu we wrażliwych układach biologicznych przez 10 pasaży.

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 Wirus pryszczycy typu A wykazuje wysoką aktywność biologiczną, antygenową i immunogenną zarówno w postaci natywnej, jak i po inaktywacji.

Na podstawie uzyskanych danych można stwierdzić, że szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 w swoim widmie antygenowym i immunologicznym jest oryginalnym, nowym taksonomicznie, nieznanym wcześniej wariantem wirusa pryszczycy typu A.

Aby zmniejszyć ryzyko epizootyczne, konieczna jest wczesna profilaktyka szczepionkowa nowo pojawiających się ognisk choroby, co wymaga nowoczesnych szczepionek o wysokiej immunogenności.

Przeprowadzona przez zgłaszającego analiza stanu wiedzy, obejmująca poszukiwanie patentowych i naukowo-technicznych źródeł informacji oraz identyfikacja źródeł zawierających informacje o analogach proponowanego wynalazku, pozwoliła stwierdzić, że zgłaszający nie znaleźć źródła charakteryzujące się cechami identycznymi ze wszystkimi cechami proponowanego wynalazku. Określenie z listy zidentyfikowanych analogów prototypu jako najbliższego pod względem ogółu cech analogii pozwoliło ustalić zespół cech wyróżniających proponowanej szczepionki, które są istotne w odniesieniu do zakładanego przez wnioskodawcę wyniku technicznego, ustalonych w niezależnym zastrzeżeniu wzoru.

W związku z tym zastrzegana szczepionka odpowiada poziomowi zdolności patentowej „nowości”.

W celu sprawdzenia zgodności proponowanej szczepionki z warunkiem zdolności patentowej „etap wynalazczy” przeprowadzono dodatkowe poszukiwania znanych rozwiązań w celu zidentyfikowania cech zawartych w części odróżniającej zastrzeżenia niezależnego wynalazku. Wyniki poszukiwań wykazały, że zaproponowane rozwiązanie nie odbiega jednoznacznie od specjalisty ze znanego poziomu technologii określonego w odpowiedniej części opisu (nie zidentyfikowano rozwiązań posiadających cechy zbieżne z cechami charakterystycznymi proponowanego wynalazku), oraz nie zidentyfikowano wpływu przemian przewidzianych przez zasadnicze cechy proponowanej szczepionki na osiągnięcie wyniku technicznego.

Zatem proponowana szczepionka spełnia wymóg zdolności patentowej „etapu wynalazczego”.

Istotę wynalazku wyjaśniono w wykazach sekwencji, w których:

SEQ ID NO:1 przedstawia sekwencję nukleotydową genu białka VP 1 szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A.

SEQ ID NO: 2 sekwencja aminokwasowa białka VP 1 szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A.

Istotę wynalazku ilustruje dendrogram odzwierciedlający pokrewieństwo filogenetyczne szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu serologicznego A ze szczepami epizootycznymi i szczepionkowymi wirusa pryszczycy typu A Dendrogram opiera się na porównaniu pełnych sekwencji nukleotydowych genu VP1.

Istotę proponowanego wynalazku zilustrowano przykładami jego zastosowania, które nie ograniczają zakresu wynalazku.

Szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A wyizolowano z materiału terenowego otrzymanego przez Federalną Instytucję Państwową „ARRIAH” w postaci nabłonka oftalmicznego od bydła podejrzanego o pryszczycę, podczas diagnostyka laboratoryjna tej choroby i jej różnicowanie od innych chorób pęcherzykowych. Do izolacji wirusa wykorzystano szereg metod biologicznych, wirusologicznych i biochemicznych.

Metody biologiczne i wirusologiczne obejmowały zaszczepienie materiału z izolatu terenowego bydła, a następnie adaptację wirusa do hodowli pierwotnych trypsynizowanych i ciągłych linii komórkowych. Wykorzystano hodowle komórkowe SP, PSGK-30, IB-RS-2 i BNK-21. Pierwotne i ciągłe hodowle komórkowe do założenia testu biologicznego prowadzono na odpowiednich pożywkach w warunkach stacjonarnych w butelkach o pojemności 50 100 cm 3, wypłukanych z podłoża hodowlanego i zakażonych 10% zawiesiną materiału aftowego (wielokrotność infekcji wynosił 1–10 TCD 50 na komórkę), przygotowanego w roztworze Hanksa z 0,5% GLA i antybiotykami według standardowej receptury. W celu usunięcia mikroflory i składników komórek balastowych zawiesinę potraktowano chloroformem w stosunku 1:10. Po 30-minutowej inkubacji w temperaturze 37°C do fiolek dodano 5–10 cm3 podłoża nośnego i inkubowano w temperaturze 37°C aż do pojawienia się wirusa CPE. W obecności CPD (zaokrąglenie komórek, wzrost ich gęstości optycznej, degeneracja i oddzielenie komórek od szkła) fiolki poddano zamrażaniu-rozmrażaniu, oczyszczaniu zawiesiny komórek za pomocą chloroformu i wirowaniu przy 3000 g przez 15 minut. Powstały materiał zawierający wirusa wykorzystano do kolejnych pasaży i badań RSC i ELISA na obecność antygenu wirusowego, z wykorzystaniem zestawu komercyjnych surowic specyficznych dla danego typu wirusa oraz surowicy przechowywanej w muzeum szczepów Federalnej Instytucji Państwowej „ARRIAH”.

Wyniki adaptacji wirusa do różnych hodowli komórkowych przedstawiono w tabeli 4.

Dane przedstawione w tabeli 4 wskazują na dobrą aktywność adaptacyjną szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy typu A do stosowanych hodowli komórkowych.

Wirus wyizolowany powyższymi metodami został przebadany w RSC za pomocą zestawu zestawów diagnostycznych na obecność wszystkich typów wirusa pryszczycy w celu identyfikacji jego typu.

Wyniki typowania wirusa w RSC przedstawiono w tabeli 5.

Wyniki przedstawione w tabeli 5 wskazują, że wyizolowany wirus należy do typu A.

Inaktywowana, sorbowana szczepionka przeciwko pryszczycy typu A przygotowana jest ze szczepu wirusa A nr 2045/Kirgistan/2007 hodowanego w hodowli zawiesinowej komórek BHK-21. Jako podłoże pomocnicze stosuje się roztwór Earle'a bez surowicy z dodatkiem FGMS, GBCS i antybiotyków o pH 7,4 7,8. Hodowlę komórkową infekuje się wirusem w ilości 0,001–0,05 TCD 50 na komórkę.

Wirus hoduje się w temperaturze 36 37°C. Po 11–13 godzinach inkubacji zlicza się żywe i martwe komórki za pomocą barwienia błękitem trypanu. Jeżeli liczba żywych komórek wynosi 15 20%, inkubację kontynuuje się przez kolejne 2 3 godziny. Gdy liczba martwych komórek osiągnie 90-95%, hodowlę przerywa się i sprawdza się sterylność zawiesiny zawierającej wirusa oraz zawartość składników 146S i 75S. Ilość składników 146S+75S w zawiesinie musi wynosić co najmniej 0,5 µg/cm 3 .

W tabelach 6, 7, 8 i 9 przedstawiono wyniki hodowli szczepów A nr 2045/Kirgistan/2007, A (Gruzja) 1999/ nr 1721-DEP, A nr 1707 „Armenia-98-DEP” i A 22 nr 550 wirusa pryszczycy typu A, z czego wynika, że ​​właściwości kulturowe wymienionych szczepów różnią się istotnie w dwóch badanych parametrach:

1) szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 charakteryzuje się krótszym okresem reprodukcji (12,5 godz.) w porównaniu ze szczepem A (Gruzja) 1999/ nr 1721-DEP i A nr 1707 „Armenia-98-DEP” (15–16 godziny);

2) szczepy A nr 2045/Kirgistan/2007 i A 22 nr 550 dają wyższy procent wydajności składników immunogennych (odpowiednio 90,1% i 89,9%) w porównaniu ze szczepami A (Gruzja) 1999/nr 1721-DEP oraz A nr 1707 „Armenia-98-DEP” (odpowiednio 61,5% i 58,1%).

Bezpośrednio po zakończeniu cyklu namnażania wirusa, nie przerywając termostatowania, do zawiesiny zawierającej wirusa dodaje się 15–20% roztwór AEEI zakwaszony lodowatym kwasem octowym do pH 8,0–8,5. Końcowe stężenie AEEI w zawiesinie zawierającej wirusa powinno wynosić 0,025 0,05%. Inaktywację zakaźności wirusa przeprowadza się przez 12 24 godzin w temperaturze 36 37°C i pH 7,2 7,6, mieszając po 5 6 godzinach przez 3 5 minut. Pozostałość AEEI zobojętnia się przez dodanie tiosiarczanu sodu.

Do ciepłej zawiesiny dodaje się 10% roztwór PHMG do stężenia 0,005 0,007% w celu flokulacji zanieczyszczeń balastowych i dezaktywacji ewentualnych zanieczyszczeń. Flokulowane zanieczyszczenia balastowe poddawane są sedymentacji, a następnie dekantacji.

W Tabeli 10 przedstawiono wyniki badań wpływu inaktywacji i oczyszczania materiału antygenowego przy użyciu AEEI i PHMG na immunogenne (146S i 75S) składniki wirusa pryszczycy szczepów A nr 2045/Kirgistan/2007 i A (Gruzja ) 1999/nr 1721-DEP.

Dane przedstawione w Tabeli 10 wskazują, że immunogenne składniki wirusa pryszczycy szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 nie są gorsze pod względem odporności na inaktywację i oczyszczanie w warunkach produkcyjnych w stosunku do wirusa pryszczycy szczep A (Georgia) 1999/nr 1721-DEP. Szczególnie istotny jest fakt, że w procesie inaktywacji i oczyszczania wirusa ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 nie nastąpiły istotne zmiany w ilości składników 146S i 75S uzyskiwanych podczas namnażania wirusa.

Powstały antygen monitoruje się pod kątem awirulencji, zawartości białka specyficznego dla wirusa, składników 146S i 75S wirusa oraz sterylności. Wymagane stężenie składników 146S i 75S w dawce szczepionkowej szczepionki adsorbowanej uzyskuje się poprzez zatężenie antygenu GOA.

Obliczoną objętość GOA o stężeniu 3% dodaje się do schłodzonej zawiesiny antygenu przy pracującym mieszadle. Mieszanie prowadzi się przez 30 minut. Po sedymentacji GOA odsącza się obliczoną objętość pozostałej zawiesiny. Końcowe stężenie GOA powinno mieścić się w granicach 1,62±0,488 R<0,01 мг/см 3 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 3,0 мкг/см 3 готового препарата. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,05÷0,15%, что соответствует 500,0÷1500,0 мкг сапонина в 1 см 3 готовой вакцины.

Powstałą szczepionkę pakuje się w szklane fiolki, a jej sterylność monitoruje się zgodnie z GOST 28085.

Niezłośliwość i nieszkodliwość szczepionki badano na 5 głowach bydła, wprowadzając szczepionkę najpierw pod błonę śluzową języka w dawce 2,0 cm 3, a następnie podskórnie w dawce 10,0 cm 3. Stan kliniczny zwierząt monitoruje się przez 10 dni. Niezjadliwa, nieszkodliwa i sterylna szczepionka jest testowana pod kątem aktywności immunogennej u bydła i świnek morskich.

Otrzymana szczepionka jest jasnożółtą cieczą z luźnym białym osadem sorbentu, który podczas przechowywania tworzy się na dnie butelki i łatwo rozpada się na jednorodną zawiesinę po wstrząśnięciu.

Optymalny skład otrzymanej szczepionki adsorbatowej przeciwko pryszczycy typu A podano w Tabeli 11.

Niezjadliwość i bezpieczeństwo szczepionki zbadano na 5 głowach bydła. Lek podawano każdemu zwierzęciu pod błonę śluzową języka w dawce 2,0 cm 3 , a następnie podskórnie w dawce 10,0 cm 3 . Stan kliniczny zwierząt monitorowano przez 10 dni.

Po zbadaniu awirulencji i bezpieczeństwa szczepionkę zbadano pod kątem aktywności immunogennej. Badanie przeprowadzono na 4 głowach cieląt o masie ciała 70 80 kg. Szczepionkę adsorbatową podawano podskórnie w dawce 2,0 cm3. Kontrolne zakażenie cieląt przeprowadzono homologicznym szczepem wirusa pryszczycy w 28. dniu po szczepieniu (DPV). Wyniki badań przedstawiono w tabeli 12.

Z danych przedstawionych w tabeli 12 wynika, że ​​na 4 zwierzęta 1 cielę zachorowało, 3 były zabezpieczone przed uogólnieniem procesu w 28. dniu po szczepieniu. Poziom odporności humoralnej u zaszczepionych zwierząt wynosił 4,81±0,53 log2.

Przeprowadzono badania szczepionki adsorbatowej przeciwko pryszczycy typu A, wyprodukowanej jak opisano w przykładzie 2 i zawierającej mcg:

Niezjadliwość i bezpieczeństwo otrzymanej szczepionki badano na 5 głowach bydła. Lek podawano każdemu zwierzęciu pod błonę śluzową języka w dawce 2,0 cm 3 , a następnie podskórnie w dawce 10,0 cm 3 . Stan kliniczny zwierząt monitorowano przez 10 dni po zakażeniu.

Po zbadaniu awirulencji i bezpieczeństwa szczepionkę zbadano pod kątem aktywności immunogennej. Badanie przeprowadzono na 5 sztukach bydła o masie 250 300 kg i 5 sztukach cieląt o masie 70 80 kg. Szczepionkę adsorbatową podawano podskórnie w dawce 2,0 cm3. Kontrolne zakażenie szczepem homologicznym wirusa pryszczycy przeprowadzono w 28. dniu po szczepieniu (DPV) w przypadku cieląt i 90. dniu w przypadku byków. Wyniki badań przedstawiono w tabelach 13–14.

Z danych przedstawionych w tabelach 13-14 wynika, że ​​na 5 sztuk zachorował 1 buhaj, 4 były zabezpieczone przed uogólnieniem procesu w 90. dniu po szczepieniu, a przed uogólnieniem procesu 5 głów cieląt było chronionych w 28 dniu po szczepieniu. Poziom odporności humoralnej u zaszczepionych zwierząt w momencie zakażenia wynosił 5,00±0,27 log 2 dla byków i 6,20±0,63 log 2 dla cieląt, co świadczy o skuteczności badanej szczepionki.

Z powyższych informacji wynika zatem, że podczas stosowania proponowanej szczepionki spełniony jest następujący zestaw warunków:

inaktywowana, sorbowana szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, według wynalazku, przeznaczona do stosowania w rolnictwie, mianowicie w wirusologii i biotechnologii weterynaryjnej;

Dla proponowanego wynalazku w postaci określonej w zastrzeżeniu niezależnym wynalazku, możliwość jego realizacji została potwierdzona środkami i metodami podanymi we wniosku lub znanymi przed datą pierwszeństwa;

szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, sorbowana inaktywowana, wykonana ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 według proponowanego wynalazku, ma wysoką aktywność immunogenną i jest w stanie zapewnić skuteczną ochronę podatnych zwierząt przed pryszczycą wirus choroby jamy ustnej typu A krążący w krajach Zakaukazia, Azji Środkowej, Bliskiego i Dalekiego Wschodu.

Źródła informacji

1. Bojko A. A. Deklaracja sur I apparition en URSS d un type wirusa aphteux różnych des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE, 1965, 64, t. 2. – s. 1075-1077.

2. Pepep X. Pryszczyca: przeł. z niemieckiego / G.A. Surkova; edytowany przez i ze wstępem. P.V. Malarz. - M.: Kolos, 1971. - 432 s.

3. Pryszczyca: monografia / A.N. Burdow, A.I. Dudnikov, P.V. Malyarets [i inni]. - M.: Agropromizdat, 1990. - 320 s.

4. Choroby wirusowe zwierząt / V.R. Syurin, A.Ya. Samuylenko, B.V. Sołowiew [i inni]. - M.: VNIITIBP, 1998. - P.532-548.

5. Tymczasowe instrukcje dotyczące wytwarzania i kontroli szczepionki przeciw pryszczycy zawierającej skoncentrowany wodorotlenek glinu z lapinizowanego wirusa A22. Zatwierdzony przez Państwową Administrację Spraw Wewnętrznych ZSRR 25 marca 1971 r.

6. Przepisy przemysłowe dotyczące produkcji szczepionki przeciwko pryszczycy typu A, O, C, Asia-1, Sat-1, Sat-2 i Sat-3, inaktywowanej, sorbowanej jedno- i wieloważnej (z wirusa hodowanego w BHK- 21 komórek): zatwierdzone. Dyrektor Federalnej Instytucji Państwowej „ARRIAH” 11.09.2009. - Włodzimierz, 2009. - 216 s.

7. Przepisy przemysłowe dotyczące produkcji inaktywowanej emulsji jedno- i wieloważnej szczepionki przeciwko pryszczycy w celu zapobiegania pryszczycy u świń (z wirusa hodowanego w komórkach VNK-21): zatwierdzone. Dyrektor Federalnej Instytucji Państwowej „ARRIAH” 11.09.2009. - Włodzimierz, 2009. - 240 s.

8. Pat. RF 2294760, IPC A61K 39/135, Inaktywowana sorbowana szczepionka przeciwko pryszczycy typu A/V.V. Michałiszin, T.N. Lezova, A.V. Szczerbakow, D.V. Michałiszin, N.S. Mamkow; FSBI „ARRIAH” – aplikacja. 21.12.2004; pub. 06.10.2006 (prototyp).

9. Pat. RF 2140452, IPC A61K 39/135, Szczep N 1707 Wirus pryszczycy „ARMENIA-98” typu A do produkcji preparatów diagnostycznych i szczepionek/V.M. Zacharow, V.K. Spirin, AI Gritsenko [i inni]; FSBI „ARRIAH” - Aplikacja. 15.03.1999; pub. 27 października 1999

10. Pat. RF 2242513, IPC A61K 39/135, Szczep A (GRUZJA) 1999/nr 1721 wirus pryszczycy typu A do wytwarzania preparatów diagnostycznych i szczepionek; FGU „ARRIAH” – Deklaracja. 24 listopada 2003; pub. 20.12.2004

11. Pryszczyca. Sytuacja na świecie i najważniejsze wydarzenia epidemiologiczne w latach 2005-2006/ K. Sumption, J. Lubroth, T. Murrai, S. De la Rocque// Empress/Focus on. - 2007. - nr 1.

12. Pat. RF 594771, IPC A61K 39/12, Środek do inaktywacji wirusów w produkcji leków przeciwwirusowych / N.A. Ulupow, A.I. Dudnikov, PA Gembitsky, DS Żuk; VNIYAI – aplikacja 07.05.1973; pub. 07.07.93

13. Pat. RF 2054039, IPC A61K 39/135, Metoda oczyszczania i sterylizacji hodowanego wirusa pryszczycy / T.N. Lezova, N.A. Ulupow, V.V. Borisow, V.V. Michałiszin, A.I. Dudnikov, PA Gembitski; VNIYAI – aplikacja 07.02.1992; pub. 02.10.1996

14. Automatyczny podgląd. ZSRR 784335, C12Q 1/02, Metoda określania jakości surowców wirusowych / A.F. Bondarenko; VNIYAI – aplikacja 07.04.1979; pub. 20.03.2000

15. Pat. 2451745 Federacja Rosyjska, IPC A61K 39/135, szczep A 2045/Kirgistan/2007 wirus pryszczycy Aphtae epizooticae typ A do monitorowania aktywności antygenowej i immunogennej szczepionek przeciwko pryszczycy oraz do wytwarzania produktów biologicznych do diagnostyki i specyficznego zapobiegania pryszczycy typu A/E.V. Belik, V.V. Borysow, A.V. Szczerbakow, S.R. Kremenczugskaja [i inni]; FSBI „ARRIAH” - Aplikacja. 26.07.2010; pub. 27 maja 2012

16. OIE. Podręcznik testów diagnostycznych i szczepionek dla zwierząt lądowych (ssaki, ptaki i piwa). - 6 wyd. - Paryż, 2008. - Vol.1.- P 203÷207.

17. Selekcja szczepów szczepionkowych przeciwko pryszczycy – recenzja/D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bregman // ks. Nauka. Techn. OIE. -2005. - Tom 24, nr 3. - s. 981–993.

Tabela 1
Spektrum antygenowe szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirusa pryszczycy serotyp A wg danych RSC
Porównanie szczepów	Wskaźniki
	r 1	r 2	R%
A/Iran/97	0,05	0,11	8
A22/Irak 24/64	0,08	1	28
A/Iran/05	0,46	1	68
A/Türkiye/Ob	0,59	0,76	66
A22 nr 550/64	0,02	1	14
Uwaga: R s: 40% – szczepy wirusa pryszczycy należą do tego samego podtypu R=(%): 25÷40 - dla różnych podtypów.

Tabela 4
Właściwości biologiczne wirusa epizootycznego szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 wirus pryszczycy typ A
System reprodukcji wirusa	Czas przejawu aktywności biologicznej (godziny)	Liczba przejść adaptacyjnych	Charakterystyka adaptowanego materiału
			Aktywność w RSK	Miano aktywności zakaźnej (Ig TCD 50 / cm 3)
JV	20	3	1:2	6,5
PSGK-30	20	3	1:6	7
IB-RS-2	24	4	1:4	6,33
WNK-21	18	9	1:12	7,5-8,25

Tabela 5
Oznaczanie rodzaju wirusa w 33% zawiesinie materiału aftowego w RSC (badanie nr 2045 „Kirgistan/07”)
g/i surowicy w rozcieńczeniu roboczym	Badanie nr 2045					Kontrola
	cały	1:2	1:4	1:8	k/a	A/Turcja/06	O/Primorski/2000	Azja-1 Amur/2005	sob-1	sob-2	sob-3	b/a
A/Turcja/06	4	4	3	-		4	-		-	-	-	-
O/Primorski/2000	-	-	-	-		-	4	-	-	-	-	-
Azja-1 Amur/2005	-	-	-	-		-	-	4	-	-	-	-
sob-1	-	-	-	-		-	-	-	4	-	-	-
sob-2	-	-	-	-		-	-	-	-	4	-	-
sob-3	-	-	-	-		-	-	-	-	-	4	-
b/s	-	-	-	-		-	-	-	-	-	-	-
pne	4	4	4	4		4	4	4	4	4	4	4
Uwaga: 4 - 100% opóźnienie hemolizy;
„-” - całkowita hemoliza;
b/s – bez serwatki;
b/a – bez antygenu;
b/c – bez dopełnienia

Tabela 6
Hodowla wirusa pryszczycy typu A, szczep A nr 2045/Kirgistan/2007 w zawiesinie komórek BNK-21
NIE.		Dawka infekcyjna (TCD 50/cl)		Miano wirusa (Ig TLW 50 /CM 3)	WSZYSTKO (µg/cm3)
1	2,2	0,1	18		2,0	-	-
2	2,2	0,01	18	-	1,6	-	-
3	2,2	0,001	18	-	1,67	-	-
4	2,0	0,4	7	8,00	1,72	1,48	86,3
5	1,2	1,1	9,5	8,00	1,67	1,55	93,1
6	3,8	0,01	15	7,75	2,89	2,64	91,4

Tabela 7
Hodowla wirusa pryszczycy typu A, szczep A (Gruzja) 1999/nr 1721-DEP w zawiesinie komórek BNK-21
NIE.	Stężenie komórek (miliony/cm3)	Dawka infekcyjna (TCD 50/cl)	Czas trwania reprodukcji (godziny)		VSB (µg/cm3)	Składniki 146S+75S (µg/cm 3)	% wydajności składników 146S+75S
1	2,5	1,5	14,0	8,25	2,93	1,72	58,7
2	2,5	1,2	15,0	8,50	3,12	1,80	57,7
3	3,0	1,2	17,0	8,00	2,06	1,33	64,6
4	2,6	1,1	15,5	8,25	2,71	1,83	67,5
5	2,3	1,0	16,5	7,50	2,38	1,27	53,4
6	2,8	1,0	14,5	7,75	2,27	1,49	65,6
7	2,7	0,6	16,0	7,50	2,06	1,34	65,0
8	3,1	0,05	18,0	7,75	2,31	1,19	51,5
9	3,5	0,001	20,0	7,25	2,54	1,76	69,3

Tabela 8
Hodowla wirusa pryszczycy typu A, szczep A nr 1707 „Armenia-98-DEP” w zawiesinie komórek BNK-21
NIE.	Stężenie komórek (miliony/cm3)	Dawka infekcyjna (TCD 50/cl)	Czas trwania reprodukcji (godziny)	Miano wirusa (Ig TCD 50 / cm 3)	VSB (µg/cm3)	Składniki 146S+75S (µg/cm 3)	% wydajności składników 146S+75S
1	2,5	1,5	14,5	8,00	3,30	2,20	66,8
2	2,5	1,1	16,0	8,00	2,29	1,33	58,2
3	2,5	1,0	16,5	7,75	2,24	1,21	54,1
4	2,6	0,91	14,5	8,00	2,53	1,52	60,1
5	2,6	0,5	15,5	7,75	1,73	0,89	51,5

Tabela 9
Hodowla wirusa pryszczycy typu A, szczep A22 nr 550, w zawiesinie komórek BNK-21
NIE.	Stężenie komórek (miliony/cm3)	Dawka infekcyjna (TCD 50/cl)	Czas trwania reprodukcji (godziny)	Miano wirusa (Ig TCD/cm3)	VSB(µg/cm3)	Składniki 146S+75S (µg/cm 3)	% wydajności składników 146S+75S
1	2,5	1,5	13	8,00	2,48	2,19	88,3
2	2,6	1,0	12	7,25	1,17	1,04	88,8
3	2,7	1,0	11	7,75	2,00	1,83	91,6
4	2,4	0,8	14	8,00	1,78	1,48	89,3
5	2,4	0,5	12	7,50	1,34	1,26	94,3
6	3,0	0,05	13	7,25	2,06	1,80	87,2

Tabela 10
Dane porównawcze dotyczące odporności wirusa pryszczycy szczepu A (Gruzja) 1999/nr 1721 i szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 na inaktywację AEEI i oczyszczanie sterylizacyjne PHMG
Napięcie	po uprawie		po inaktywacji i oczyszczeniu
	VSB m kg/ml	146S+75Smkg/ml	VSB µg/ml	146S+75S µg/ml
A nr 2045/Kirgistan/2007	3,12	1,80	2,69	1,93
A (Gruzja) 1999/nr 1721 n=5	2,64±0,19	1,59±0,2	2,35±0,11	1,53±0,12
+-	0,48	0,21	0,34	0,4

Tabela 11
Optymalny skład składowy szczepionki przeciwko pryszczycy typu A, inaktywowanej, sorbowanej
Składniki	Ilość (µg/1 cm3)
	Minimum	Wyróżniony	Maksymalny
Awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy w postaci immunogennych (146S i 75S) składników wirusa pryszczycy typu A, szczep A nr 2045/Kirgistan/2007	3,0	3,0	>3,0
GOA	11000,0	12000,0	15000,0
Saponina	500,0	750,0	1500,0
Wspieranie środowiska	Do 1000000,0	Do 1000000,0	Do 1000000,0

Tabela 12
NIE.	Miano BHA log 2 w porównaniu z A nr 2045/Kirgistan/2007 w DPV				Obecność uogólnienia
	7	14	21	28
1	5,25	6,25	5,25	5,00	-
2	4,50	6,50	6,00	6,25	-
3	5,25	6,25	5,75	4,00	+
4	3,75	6,50	6,00	4,00	-
M±m	4,69±0,36 r<0,001	6,38±0,07 r<0,001	5,75±0,18 r<0,001	4,81±0,3 r<0,005	1/4

Tabela 13
Wyniki badań adsorbowanej szczepionki przeciwko pryszczycy typu A ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 na bykach
NIE.										Obecność uogólnienia
	7	14	21	28	35	56	77	83	90
1	5,75	6,00	5,25	5,75	5,25	4,50	5,25	5,25	5,50	+
2	7,00	6,25	5,50	6,50	5,50	4,75	5,00	5,25	5,00	+
3	7,50	7,00	7,25	7,00	5,75	4,75	5,00	5,25	5,50	-
4	5,25	6,00	5,50	5,25	5,50	5,00	3,50	4,50	4,00	+
5	7,75	6,25	5,00	5,25	4,75	3,75	3,50	5,25	5,00	+
M±m	6,65±0,49	6,30±0,18	5,70±0,40	5,95±0,35	5,35±0,17	4,55±0,22	4,45±0,39	5,10±0,15	5,00±0,27	4/5
	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001	R<0,001

Tabela 14
Wyniki badań adsorbowanej szczepionki przeciwko pryszczycy typu A ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007 na cielętach
NIE.	Log 2 miana VNA w porównaniu z A nr 2045/Kirgistan/2007 na DPV				Obecność uogólnienia
	7	14	21	28
1	7,00	6,00	6,50	6,50	-
2	7,75	6,00	6,00	7,25	-
3	6,75	6,00	5,00	6,50	-
4	7,50	6,75	4,5	3,75	-
5	8,00	6,25	6,00	7,00	-
M±m	7,4±0,23 r<0,001	6,20±0,15 r<0,001	5,60±0,37 r<0,001	6,20±0,63 r<0,005	0/5

PRAWO

1. Szczepionka przeciwko pryszczycy typu A, inaktywowana, sorbowana, zawierająca substancję czynną i ukierunkowane dodatki, znamienna tym, że jako substancja czynna zawiera niezjadliwy i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu wirusa z rodziny Aphtae epizooticae. Picornaviridae, rodzaj Aphtovirus, serotyp A, zdeponowany w zbiorach Państwowej Instytucji Federalnej „VGNKI” pod numerem rejestracyjnym szczep produkcyjny wirusa pryszczycy serotyp A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP, w ilości skutecznej .

2. Szczepionka według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007-DEP, otrzymany we wrażliwym układzie biologicznym i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A.

3. Szczepionka według zastrzeżenia 2, znamienna tym, że zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007-DEP, uzyskany korzystnie w ciągłej hodowli komórek pochodzenia zwierzęcego i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie 146S i immunogenne składniki 75S wirusa pryszczycy typu A.

4. Szczepionka według zastrzeżenia 3, znamienna tym, że zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007-DEP, uzyskany korzystnie w ciągłej hodowli komórkowej BHK-21 i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie 146S i Immunogenne składniki wirusa pryszczycy typu A 75S.

5. Szczepionka według zastrzeżenia 4, znamienna tym, że zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kirgistan/2007-DEP, uzyskany korzystnie w ciągłej hodowli komórkowej BHK-21 i stanowiący zawiesinę zawierającą głównie 146S i Immunogenne składniki 75S wirusa pryszczycy typu A w ilości co najmniej 3,0 µg na 1 cm3 produktu gotowego.

6. Szczepionka według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że jako ukierunkowany dodatek zawiera adiuwant-sorbent wodorotlenek glinu (GOA).

7. Szczepionka według zastrzeżenia 6, znamienna tym, że zawiera GOA, korzystnie w ilości 11000,0-15000,0 mcg na 1 cm3 gotowego produktu.

8. Szczepionka według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że zawiera adiuwant saponinowy jako ukierunkowany dodatek.

9. Szczepionka według zastrzeżenia 8, znamienna tym, że zawiera adiuwant saponinowy, korzystnie w ilości 500,0-1500,0 µg na 1 cm3 gotowego produktu.

10. Szczepionka według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że zawiera podłoże pomocnicze jako ukierunkowany dodatek.

11. Szczepionka według zastrzeżenia 10, znamienna tym, że zawiera podłoże pomocnicze w ilości do 1 000 000,0 mcg na 1 cm3 gotowego produktu.

12. Szczepionka według któregokolwiek z zastrzeżeń 1-11, znamienna tym, że zawiera awirulentny i oczyszczony materiał antygenowy ze szczepu A nr 2045/Kyrgyzstan/2007-DEP, uzyskany korzystnie w ciągłej hodowli komórkowej BHK-21 i reprezentujący zawiesina zawierająca głównie immunogenne składniki 146S i 75S wirusa pryszczycy typu A, GOA, saponinę i podłoże pomocnicze w proporcji mcg.

Do kwestii szczepień krów należy podejść bardzo poważnie, gdyż zwierzęta hodowlane są jednym z głównych producentów produktów, które spożywamy. Głównym aspektem w tym obszarze nie jest ochrona zdrowia zwierząt, ale ochrona i troska o zdrowie ludzi spożywających produkty pochodzenia zwierzęcego. Możliwe jest zapobieganie przedostawaniu się mięsa i mleka od chorych zwierząt do sieci dystrybucyjnej oraz zapobieganie chorobom niebezpiecznym dla zdrowia poprzez terminowe szczepienia i badania na zwierzętach.

Prowadzone są badania nad chorobami takimi jak białaczka i bruceloza. Wymagane są także szczepienia przeciwko wściekliźnie, wąglikowi, pryszczycy.

Istnieje opinia, że ​​mięso lepiej kupować od prywatnych handlarzy, którzy nie szczepią, więc jest to mięso przyjazne dla środowiska. Jednak tak nie jest. Takie mięso może być nawet bardzo niebezpieczne. Prywatni rolnicy, a także właściciele gospodarstw hodowlanych są zobowiązani do prowadzenia działań profilaktycznych - szczepień i badań.

Rodzaje i przeznaczenie szczepionek oraz dawki

Złożone szczepionki monowalentne:

• Szczepionka TAURUS ma dość duży zasięg przeciwko różnym chorobom zakaźnym, takim jak zapalenie nosa i tchawicy (RTI), biegunka wirusowa (VD), paragrypa-3 (PG-3) i leptospiroza.
• KOMBOVAK, Bovilis BVD to szczepionki przeciwko zakaźnemu zapaleniu nosa i tchawicy, paragrypie-3, wirusowej biegunce, infekcjom oddechowym, rota i koronawirusowym.
• Powiązana szczepionka jest szczepionką poliwalentną zawierającą szczepy wąglika i pryszczycy.
• Trichostav to szczepionka wieloważna przeznaczona do zapobiegania trichofitozie i chorobom grzybiczym skóry.
• Nobivac jest poliwalentną szczepionką przeciw wściekliźnie.
• Istnieją również szczepionki poliwalentne i surowice na określony typ choroby.

W jakim wieku należy wykonywać badania w kierunku chorób zakaźnych?

• 2 miesiące – przeprowadza się badania na gruźlicę (gruźlicę);
• 4 miesiące – badanie na brucelozę;
• 6 miesięcy – białaczka.

Po rozpoczęciu laktacji przez krowę należy dwa razy w roku przeprowadzać badania na brucelozę i gruźlicę.

W jakim wieku przeprowadza się rutynowe szczepienie?

• Szczepienie rozpoczyna się u cieląt już od najmłodszych lat, gdyż (jest to odporność matki), która przekazywana jest wraz z mlekiem, działa dość krótko.
• Złożone szczepionki monowalentne – cielęta należy szczepić od 1,5 miesiąca życia w odstępie 3 tygodni.
• 6 miesięcy – szczepienie jednorazowe, w tym wieku nie jest wymagane szczepienie przypominające.

Wymagane jest coroczne szczepienie, które przeprowadza się na 2 tygodnie przed inseminacją.

Szczepionki poliwalentne

• Od 1,5 do 6 miesięcy - szczepienie przeciwko wściekliźnie, pryszczycy, wąglikowi, salmonelli (z przerwą między szczepieniami 8-12 dni), kolibakterioza (szczepienie przypominające po 2 tygodniach), trichofitoza.
• Zwierzęta starsze niż 12 miesięcy - karbunkuł rozedmowy, pryszczyca, wścieklizna, wąglik, teilerioza, pastereloza, bruceloza.
• Coroczne szczepienie dorosłych jałówek przeprowadza się na 2-3 tygodnie przed inseminacją.

Nie ma możliwości użycia produktów pochodzenia zwierzęcego bezpośrednio po szczepieniu; niektóre rodzaje szczepionek mają swoje własne terminy (zatwierdzone przez Rosselkhoznadzor i Veterinary Sanitare Expertise), ale jeśli podasz przybliżony czas, w którym możesz już pić mleko i ubijać zwierzęta, jest to około 21-28 dni.

Pryszczyca jest niebezpieczną chorobą wirusową, o której pierwsza pisemna wzmianka pochodzi z połowy XVI wieku. Był to opis choroby bydła we włoskim mieście Fracastro. Jego nasilenie zwiększa się ze względu na możliwość zarażenia ludzi.

Pryszczyca u bydła rozprzestrzenia się bardzo szybko i zwykle ma ostry przebieg. Jest to szczególnie niebezpieczne dla młodych zwierząt, których śmiertelność w szczególnie ciężkich przypadkach może sięgać 100%.

Pryszczyca jest chorobą odzwierzęcą; może być przenoszona ze zwierząt na ludzi poprzez bezpośredni kontakt, poprzez surowe mięso i mleko, a także drogą kropelkową. Choroba jest szczególnie niebezpieczna dla dzieci, które są bardziej podatne na wirusa.

Źródłem zakażenia są chore zwierzęta – domowe i dzikie parzystokopytne lub nosiciele wirusa – ptaki, gryzonie i owady. Zakażenie następuje, gdy wirus przedostanie się przez błonę śluzową jamy ustnej, wymienia lub ran na ciele. W miejscu penetracji pojawia się mały bąbelek – tzw. afta, wewnątrz której namnaża się wirus.

Pryszczyca u krów w okresie inkubacji, który trwa średnio tydzień, charakteryzuje się ogólnym stanem depresyjnym, temperaturą do 41°C, wzmożonym wydzielaniem śliny, zmniejszoną produkcją mleka, pojawieniem się aft z mętną żółtą cieczą w jamie ustnej, języku, nosie, wymionach, biegunka. Po dniu lub dwóch w miejscu pękających pęcherzy tworzą się wrzody.

Choroba ma wyraźne objawy, co ułatwia rozpoznanie pryszczycy. Podczas badań laboratoryjnych określany jest wariant i typ wirusa. Obecnie istnieje 7 rodzajów pryszczycy i około 80 jej odmian. Faktem jest, że odporność nabyta przez zwierzę w trakcie choroby na jeden rodzaj pryszczycy nie wyklucza zakażenia innymi typami i typami chorób wirusowych.

Jest to bardzo ważne przy wyborze właściwej szczepionki. Jeżeli rozprzestrzenianie się choroby stanie się powszechne, obowiązkowe jest szczepienie klinicznie zdrowych zwierząt gospodarskich przeciwko pryszczycy. W przypadku zidentyfikowania ognisk choroby chore zwierzęta należy poddać ubojowi i utylizacji, a zdrowe zwierzęta dostarczyć do zakładu przetwórstwa mięsnego. Jednocześnie ściółka, karmniki i sprzęt są poddawane działaniu środków dezynfekcyjnych. Aby zapobiec rozprzestrzenianiu się wirusa przez ludzi i transport, w strefie zakażenia ustanawia się kwarantannę.

Wirus pryszczycy jest wysoce odporny na wysokie i niskie temperatury. Może trwać na futrze zwierzęcym przez półtora miesiąca, na ubraniach - 3, a na paszy - do 5 miesięcy. Mimo to wirus szybko umiera w wyniku narażenia na konwencjonalne środki dezynfekcyjne - formaldehyd lub wodorotlenek sodu, pod wpływem promieni ultrafioletowych i w temperaturach powyżej 60 stopni.

U małych cieląt objawy pryszczycy mogą nie być tak wyraźne. Najczęściej chorobie towarzyszy zapalenie żołądka i jelit i prowadzi do śmierci młodych zwierząt.

Pryszczyca często występuje w postaci epizootii – epidemii wśród zwierząt. Choroba ta powoduje poważne straty w rolnictwie spowodowane utratą bydła, zmniejszoną wydajnością mleczną i niską jakością produktów zwierzęcych.